میکروسکوپ فلورسانس نوعی میکروسکوپ نوری است که از منبع نور با شدت بالا برای روشن کردن نمونه و تحریک فلوروکروم‌های موجود در نمونه استفاده می‌کند.نورپردازی نمونه معمولاً با منبع نوری انجام می شود که نور ماوراء بنفش ساطع می کند.آنها به طور گسترده ای در زمینه های بیولوژیکی، پزشکی و صنعتی استفاده می شوند.
میکروسکوپ فلورسانس چگونه کار می کند؟
میکروسکوپ فلورسانس از یک لامپ جیوه یا زنون برای تولید نور فرابنفش استفاده می کند.نور وارد میکروسکوپ می شود و به یک آینه دو رنگ برخورد می کند - آینه ای که طیفی از طول موج ها را منعکس می کند و به محدوده دیگری اجازه عبور می دهد.آینه دو رنگی نور فرابنفش را تا نمونه منعکس می کند.برخی از نمونه ها به طور طبیعی تحت نور فرابنفش فلورسانس می شوند زیرا حاوی مواد فلورسنت مانند کلروفیل هستند.اگر نمونه ای که باید مشاهده شود به طور طبیعی فلورسانس نمی کند، می توان آن را با رنگ های فلورسنت به نام فلوروکروم رنگ آمیزی کرد.
میکروسکوپ فلورسانس از چه چیزی تشکیل شده است؟
1. منبع نور
رایج ترین منابع نور جیوه، زنون و ال ای دی هستند.جیوه بهترین کیفیت نور را برای میکروسکوپ فلورسانس فراهم می کند.ال‌ای‌دی‌ها به دلیل ارزان‌تر بودن نسبت به سایر منابع و مصرف انرژی کمتر، محبوب‌تر می‌شوند.
| لامپ جیوه | لامپ زنون | رهبری | |
| طول موج نور ساطع شده | 350-370 نانومتر | 400 نانومتر تا 450 نانومتر | 400-700 نانومتر |
| طول عمر (ساعت) | 200-300 | 400-600 | 10000 |
| مزیت - فایده - سود - منفعت | 1. نور با شدت بالا، رایج ترین منابع نور. 2. اشعه ماوراء بنفش و آبی-بنفش قوی ساطع می کند تا انواع فلوروفورها را تحریک کند. 3. تصاویر روشن و رنگارنگ. | 1. شدت طیفی پایدار است. 2. شدت طیفی قوی در مادون قرمز و مادون قرمز میانی. | 1. تعویض آسان. 2. نیازی به گرم کردن نیست. 3. می توان آن را روشن و خاموش کرد. 4. شدت منبع نور را کنترل کنید. |
| عیب | 1. یک عمر کوتاه. 2. زمان گرم کردن طولانی. | 1. جعبه برق DC ولتاژ پایین ویژه برای گرمای اضافی مورد نیاز است. 2. گرانتر از لامپ جیوه | 1. نور UV ضعیف تر از لامپ جیوه است. 2. هر طول موج نور به دلیل پهنای باند باریکی که از خود ساطع می کند نیاز به یک LED جداگانه دارد. |
ضمیمه فلورسنت جیوه
ضمیمه فلورسنت LED
2. فیلتر تحریک
فیلتر تحریک برای عملکرد میکروسکوپ فلورسانس ضروری است.نور با طول موج کوتاه‌تری را عبور می‌دهد که رنگ فلورسنت می‌تواند آن را جذب کند.همچنین، سایر منابع نور هیجان انگیز را مسدود می کند.
فیلتر تحریک (B,G,U,V)
3. آینه دو رنگ
آینه دو رنگی نوعی فیلتر نوری است که نور را در طول موج های خاصی منعکس می کند در حالی که امواج دیگر را ارسال می کند.در میکروسکوپ های فلورسانس برای جداسازی طول موج های تحریک و انتشار استفاده می شود.
4. فیلتر انتشار
فیلتر انتشار فقط طول موج های ساطع شده توسط فلوروفور را عبور می دهد و تمام نورهای نامطلوب خارج از این باند - به ویژه طول موج های تحریک را مسدود می کند.
5. رنگ های فلورسنت
رنگ های فلورسنت ترکیبات آلی هستند که دارای خاصیت فلورسانس هستند، که به وسیله آن می توانند با انتشار نور سبز مرئی با کنتراست بالا پس از برانگیختن نور فرابنفش بسیار روشن، تصویری فلورسنت ایجاد کنند.رنگهای فلورسنت معمولاً مورد استفاده قرار می گیرند.DAPI (49،6-diamidino-2-phenylindole)، پرتقال آکریدین، اورامین-رودامین، Alexa Fluors یا DyLight 488.
چند نوع میکروسکوپ فلورسانس است؟
1. میکروسکوپ اپی فلورسانس عمودی:
این رایج ترین نوع میکروسکوپ فلورسانس است.تحریک فلوروفور و تشخیص فلورسانس از طریق همان مسیر نوری (یعنی از طریق شی) انجام می شود.اکثر میکروسکوپ های فلورسانس، به ویژه آنهایی که در علوم زیستی استفاده می شوند، از طرح اپی فلورسانس هستند.
میکروسکوپ بیولوژیکی فلورسنت تحقیقاتی BS-2081F
2. میکروسکوپ فلورسانس کانفوکال:
میکروسکوپ فلورسانس کانفوکال: این نوع میکروسکوپ فلورسانس اسکن لیزری را با نور فلورسنت ترکیب می کند تا تصویری تولید کند.می توان از آن در طیف وسیعی از کاربردها مانند مطالعه سلول ها و بافت ها، تشخیص پروتئین ها و سایر مواد درون سلول ها و اندازه گیری ضخامت مواد استفاده کرد.
میکروسکوپ بیولوژیکی فلورسنت تحقیقاتی BS-2081F
3. میکروسکوپ فلورسانس معکوس
منبع نور و کندانسور این نوع میکروسکوپ در بالا و رو به پایین قرار دارند.زاویه روشنایی با توجه به سطح نمونه مورد بررسی باید 90 درجه باشد.
میکروسکوپ فلورسنت معکوس BS-2095F
مزایا و معایب میکروسکوپ های فلورسانس چیست؟
مزایای:
- امکان مشاهده سلول ها در موجودات زنده را بدون آسیب رساندن به آنها فراهم می کند
- ارائه تصاویر با وضوح بالا با رنگ های دقیق
- امکان مطالعه فرآیندهای زنده در سلول ها را فراهم می کند
- برای شناسایی انواع مختلف مولکول های داخل سلول ها مانند پروتئین ها یا اسیدهای نوکلئیک استفاده شود.
معایب:
-این فقط امکان مشاهده ساختارهای خاص را در داخل یک سلول که با رنگ فلورسنت برچسب گذاری شده است را می دهد.
-سفید شدن نور ناشی از تحریک الکترون در طول فرآیند فلورسانس ممکن است مولکول های واکنشی رنگ های فلورسنت را تحت تاثیر قرار دهد.در نتیجه، رنگهای واکنش‌پذیر ممکن است خاصیت شیمیایی خود را در شدت انتشار فلورسانس از دست بدهند.
سلول‌ها پس از رنگ‌آمیزی با رنگهای فلورسنت به اثر فوتوتوکسیک حساس هستند، زیرا مولکول‌های فلوروفور فوتون‌های انرژی بالا را از نور با طول موج کوتاه جذب می‌کنند.
کاربردهای میکروسکوپ فلورسانس چیست؟
میکروسکوپ های فلورسانس به طور گسترده در زمینه های مختلف تحقیقاتی و کاربردی از جمله بیوشیمی، زیست شناسی سلولی، میکروبیولوژی، ایمونولوژی و پزشکی استفاده می شود.
1. در زمینه زیست شناسی، میکروسکوپ فلورسانس شناسایی دقیق و دقیق اجزاء و فعالیت های سلولی و زیر میکروسکوپی سلولی را با کمک برچسب گذاری رنگ فلورسنت امکان پذیر می کند.
2. در زمینه پزشکی، میکروسکوپ فلورسانس می‌تواند از معرف‌های فلورسنت برای تشخیص وجود و توزیع باکتری‌ها و ویروس‌ها یا کمک به برچسب‌گذاری اهداف جراحی برای تسهیل جراحی استفاده کند.
3. در زمینه کانی شناسی، میکروسکوپ فلورسانس اغلب برای مطالعه موادی با خواص فلورسانس خود به خودی مانند آسفالت، نفت، زغال سنگ، اکسید گرافن و سایر مواد معدنی استفاده می شود.
4. در علم مواد، میکروسکوپ فلورسانس را می توان در صنعت نساجی یا صنعت کاغذ برای تجزیه و تحلیل مواد مبتنی بر الیاف استفاده کرد.
زمان ارسال: مارس-14-2023